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/ 工作中我游刃有余，成為單位最年輕的女性中層；生活中，婚姻十年來無論情感上還是生理上前夫都沒有充分給予，但我一直有道德、有情懷、有姿態地活著。雖然誘惑很多，可我誰也看不上，戀愛談得非常少，感情上很單純，和前夫在一起時還是小女孩。2014年，從外地交流來了一位領導，任閑職，不分管我。他年近五十，看上去非常年輕，身材高大，面容俊秀儒雅，談吐不凡，同事對他的評價是“風度翩翩，溫潤如玉”。起先，我對他的外形并沒有關注，只覺得這位領導工作能力極強。后來因為交集增多，他向我介紹了他的情況，很多年前就和妻子感情不好，七年前準備離婚時妻子得了血癌，生病以來盡心照顧，換了骨髓，身體趨向健康，她一直在北京陪女兒讀大學。妻女不在家時，他和好友打麻將、釣魚打發時間。直到遇到我，他很欣賞我的才情和生活態度，說我雖然小他十五歲，但思想很成熟，未來想和我共度余生。他“道德至上的苦行僧”形象讓我仰慕，隨后兩個月的時間里，我從開始的心里有數、點到為止有分寸的交往到最后全情投入、沉淪，我不知不覺從優雅自信變成了敏感多疑的怨婦。交往半年后，一次他周末回家十點不到就說要睡覺，閨蜜提示我有問題，我問他能否打電話給我，他打過來，通話將近10分鐘時，突然聽到有女人的聲音，他掛掉電話后整晚關機。次日告訴我是他妻子突然從北京回來。我不相信，沒有理會他。周一來上班，他也沒有聯系我，三天后我主動聯系他，要求翻看手機，他把手機給我的同時說道：“今天如果你發現我有問題，我對不起你；如果沒有，我們就結束。”我抱著分手也要分個明白的決心查看了他的手機。女人的第六感永遠那么準確，他有一個妻子生病前就跟隨他的情人，和我年齡相仿，已婚無孩子，體制外工作，他解釋已經分手，但始終不肯承認和那個情人見面，我找人查了沒有他妻子回家的交通信息。他實實在在地欺騙了我，我很痛苦，選擇離開，三天吃不下飯、睡不著覺，整整瘦了5斤。他一再懇求我相信他，他們已經分開了，他只想和我在一起。他非常擅長提供情緒價值和情感依賴，會耐心傾聽我講話，給予建議；會花心思制造浪漫、贈送禮物，知道我喜歡多肉植物，在我生日時送我一車的多肉植物；會溫情陪伴，做飯給我吃，帶我戶外爬山，只要是我喜歡的，都會滿足；另外他身體狀況非常好，讓我對性愛有了全新認知。總之從精神到生理層面，他滋養了我，雖然常常覺得他對我忽冷忽熱，但我已經無法離開他了。對于他的挽留，我同意了，并要求他當著我的面給她打電話說不要再聯系了。他都做到了，并把手機密碼告訴我了，手機也不再靜音。但此后，我心里便有了一根不信任他的刺。后來他被重用，從閑職領導轉為重要領導。單位中層也涉及輪崗，一把手準備把我調整到最核心的部門，正好他分管。他私下和我說，我是去這個部門的不二人選，可在黨委會上他否決了我。事后他給我解釋，一家兩個人不能都辛苦，我還年輕，要多歷練，去另一個部門鍛煉就好似收回的拳頭打出去更有力。因為愛他，我選擇尊重他，沒有鬧，只表達了不認同。不久，一次他喝醉，從他的手機里發現他有和單位另一個更年輕離異女性深夜通話、短信、微信的記錄，短信和微信內容他每天都會清除，聊什么并不清楚。同時，他和那個情人也有聯系。我沒有控制住情緒和他鬧，要求以他妻子的名義用他的手機給那個女同事發警告短信，他勉強同意，過后他泄憤式地強暴了我。五一節，他帶我去廈門旅行，彼此都非常愉悅且難忘。他甚至帶我回老家參加他母親的壽宴，我反復拒絕，他說是要和我結婚的，最后我去了，在吃飯的時候他問他媽媽我做她兒媳婦可好？他媽媽笑盈盈地說當然好。一切都看起來很美好。他過生日那天，我精心準備，想下班后給他好好慶祝。但他下班后手機關機三個小時，這期間我一直打他電話，他九點才用座機打給我說手機沒電了，在外面應酬有事，說馬上趕回來。我當時想著他只要回來了，心里就是有我。可是他一回來就質問我不相信他，我把他手機拿來一看，證實他是和前情人見面去了，我打了他一巴掌，氣走了。后來他擔心我出事把我找了回去，我朋友夫妻也來調和，他主動解釋他只是答應去談還錢的事宜，讓我相信他，我點頭答應了。之前他就解釋過，說前情人曾經借錢給他，現在她提出來要他還，我知道解釋牽強，但我不想和他分開所以選擇相信和接受。我知道，這是他第二次此地無銀三百兩。我對他越來越不信任，情感上卻越來越依賴，一邊相信他說的已經斷了，一邊懷疑他。直到春節前，前情人發短信給他，說周末去她姐姐家吃飯，問他周末有空否？我和他又鬧了一場，并且打電話給那個情人，她說他們分手了，聯系是說還錢的事情。前情人也這么說，我以為這樣他們真的斷了。他對我也很好，還當著我朋友的面承諾今年圣誕節和我去領證。可春節后，涉及我的一次工作調整，覺得不妥當，和他商量是不是找個算命的師傅看看，他說他認識一個，八字給他，正月十五后，他告訴我，我和他八字不合，克他，結婚了也要離婚，我這輩子沒有夫命，只能做情人。過了半個月，他提出分開，理由除了八字不合，還有三個：一是年齡差，將來是個麻煩；二是同單位，影響不好；三是我的是個兒子，以后負擔重。我痛苦地糾纏了一個月，他說和前情人也不可能了，人家罵他，說眼瞎了。另外他還說，聽說我和前夫要復婚了，讓我回去好好過日子。我明白和他再也回不去了，而我重度抑郁了，每天不吃不喝，睡醒了哭，哭累了睡，只有一個念頭，結束生命。還好有媽媽、朋友陪著我，我請了兩個月病假，住院治療，一直沒有上班，連單位和他家附近都繞道走。從分開治療抑郁到六月底上班，他沒有聯系過我，連我的生日都沒有信息。回到辦公室，我們遇到了，他看到我也視而不見。直到我一次喝醉酒給他打電話，他來接我，但很沒出息，又再次和他滾床單……之后又糾纏了幾次，我下定決心放手，不再理他。一周后他發短信給我說想我，想見我，打電話給我，我也沒有見面，但過了幾天我又去找他，他又拒絕見面。等我再下決心不找他時，他又來找我，甚至發現他把鑰匙放在家里，我就拿走了，過幾天，他又把鑰匙要回去。我心灰意冷，一個月沒再聯系，在他生日那天打電話給他，接通后，我說打錯掛了。次日，他來向我解釋，我們又自然地滾床單……雖然反反復復，拒絕又滾床單，但我總感覺不對，提出彼此真的不再聯系了。而他說你離開我是對的，以后就知道了。再三詢問下，才得知，他過生日那天回老家，朋友聚在一起，把他的前情人叫來陪他吃飯，前情人生活在另一個城市，下午前情人回去后突然給他打電話，說她老公知道他們的事了，逼問情人是誰，他讓前情人說出實情，他一力承擔。前情人的老公要求他給20萬，見面認錯、寫保證書。據說那個老公情緒完全失控，我擔心他司機送他見面會出事，和他商量后，我開車送他去見面，我在隔壁包廂聽到對方丈夫歇斯底里，一定要舉報他。我第一次見到他狼狽的樣子，我在旁邊安靜地陪著他。過了幾天，事情又變成，前情人懷疑是我告訴她老公的，要找我對質，他堅決否認我會做此事。前情人偷偷跑來我們所在的城市，在他家門口看我和他一起回家，打電話質問他，他當著我的面安撫前情人，信誓旦旦說他一個人在家里，沒有和我一起，并說要相信他，會等她離婚，現在先平靜下來，回去和老公安心過日子。第二天，他們先見面后，前情人約我見面，我覺得尷尬不想見，但出于好奇還是見了，彼此都有所保留，但能確定的是這個男人兩邊都承諾了結婚，并都帶我們回去見了家人。他的前情人為他付出的也不少，是個善良的女人，我們都真心地愛他，明知道他不可靠，但還是舍不得放手。卯叔，到現在，我依然無法放手，一邊不信任他，一邊舍不得放手。我該怎么辦呢？/  卯叔分析：有才情，有能力，有氣質，溫柔體貼，器大活好，這樣的男人，誰不喜歡呢?尤其是良家婦女，對這種“道德至上的苦行僧”，覺得很有安全感，遇到了，恨不得把自己的小命都交給他。然而，時間一長，狐貍的尾巴就露出來了。不得不說，這樣的男人，雖然說不專一，但算不上濫情，情人基本上是一個一個的來，每個階段有重點，對于前任、前前任，偶爾來一炮，生活很美好。嗯，這就是他為自己設計的人生。很多女人，把見過男方家人當作他的重要承諾，這是很幼稚的，其實這本身也是他為你制造浪漫甜蜜的一部分。嗯，這種男人不但智商高，情商也極高，他知道女人對什么甘之若蜜，女人喜歡什么，他就提供什么，所以如女主所說，“提供的情緒價值極高”。而他對自己擁有的這一絕世秘籍，更是心知肚明，洞若觀火，所以分手時他問女主“你說過去一年，我對你好不好？”女主說，她覺得要是錯過他，世上再也找不到像他這樣令她舒服的男人了，吃了他這口蜜，再也不想其他甜食。所以，當他啟動分手程序時，她痛苦，焦慮，即便發現他與前前任還有聯系，也選擇無視，但是，即便這樣，也沒有挽回他的心，于是，內心的最后一根弦，斷了，重度抑郁。每一位因愛而抑郁的女人，都是愛到不能自拔而身心啟動的另一套防御機制，不然，心，真的要碎掉。這樣的男人啊，你初識他是天使，后來才發現其實他是魔鬼，所謂著了魔，就是著了這樣男人的道。這個故事，是今天女主發給我的，我把其他文章往后推，發表出來。至于給她出的主意，幫助她盡快走出來，至少不要再次陷入抑郁，我基本有思路、有方向了，明天是他承諾跟她領證的日子，但這是不可能了，所以主意明天給發表出來。當然，今天不發主意，也是希望群策群力，大家有好的主意提出來，我補充進去，明天一起發表。

今天早上看到一則新聞說山東省已經頒發關于保護月經期女性的3條建議，如果診斷痛經或月經過多，可以申請休息。好人性化的規定啊。也不知重慶會不會實行。/(果子：這是因為要講細胞周期讓你跳轉到了月經周期么？/)昨天是正式工作的第一天，果子老師總是可以幫我解決一些現下的麻煩，總是可以給我一些耳目一新的東西。昨天我們主要談到了兩個主題，一個是關于轉染問題。一個是關于上次他看的文獻，有關不用抗體就可以做WB的文章，這也是刷新我的認知啊。但是我對CRISPER-Cas9的認識還不夠，所以決定這一周，最遲下一周要把這個東西搞明白。我已經決定課題組內下周文獻分享就分享果子老師推薦的那篇文獻，希望我也有所得到，到時和大家分享。在分享今天的內容之前，先跟大家聊聊有關preprint的一個事。相信很多人也是第一次聽到preprint這個詞。以下來自于維基百科的解釋：預印本（Preprint）也稱未定稿本。在學術出版領域，預印本是指尚未在需要同行評審的科學期刊上出版的科學文獻的草稿。作者在寫作完成后，便可將草稿預先公開讓大家閱讀并提出更改建議，在更改后可以提交相應學術期刊進行出版。這個東西有好也有壞（以下言論均是我的理解，以供參考） 。好處就是，在你的文章投遞一些雜志后，總是不能送外審，總是被拒，那你可以選擇preprint，這樣只要有做相關領域的人均可搜索到你的文章進行閱讀，并給你意見進行修改，你可以和那些人討論，一起修改。總之還可以。這樣也可以避免惡意審稿，以及知識產權、專利的問題。當然缺點也很多，并不是所有雜志均接收preprint的文章，所以你在選擇preprint之前要看自己心儀的雜志是否接收這種形式，比如science就不接收預印本的文章。另外就是害怕你把你的創新性的發現post出來，會有人跟著你這個做，并且超越你的進度。上周剛遞了一篇preprint。好了，今天我主要分享細胞周期的檢測方法。細胞周期/(我記得這個名詞解釋在高中生物時是必考的/)是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束所經歷的全過程，分為間期與分裂期兩個階段。如下圖：細胞周期.pngG0期：這一期的細胞稱為休眠細胞，暫時脫離細胞周期,不進行DNA復制和分裂。但這些細胞可在某些條件的誘導下重新開始DNA合成, 進行細胞分裂。G1 期：主要合成RNA、核糖體、蛋白質、脂類和碳水化合物。S期：這個時期主要合成DNA, 同時還會合成組蛋白, DNA復制所需的酶都在這一時期合成。G2期：這一時期是DNA合成后期。主要大量合成ATP、RNA、蛋白質, 包括微絲微管蛋白。M期：這個時候RNA合成停止, 蛋白質合成減少, 以及染色體高度螺旋化。其實高中生物還是挺有用的，你了解清楚每個時期主要合成的是什么，在做電鏡時你就可以認出你的細胞處于什么時期，以及在做藥物實驗時，為什么要饑餓細胞24小時。在我們做的一個負鏈RNA病毒感染的細胞模型中，大部分感染細胞的細胞周期都停留在G0//G1期，這就是因為它是一個RNA病毒，在感染早期得先抑制宿主的轉錄水平，然后促進自己的負鏈變為正鏈RNA，進行翻譯。當然這些過程有可能沒有嚴格的先后順序，同時進行。它為什么會讓細胞停留在G0//G1期呢，還有主要是病毒的哪個蛋白發揮了這些作用呢，調控了宿主細胞的哪個周期蛋白或者酶呢，這些都是我要問的問題及接下來的實驗設計。下面開始分享流式細胞術檢測PI染色細胞的方法。細胞周期檢測可以自己購買碘化丙啶（Propidium Iodide，PI），自己染色，也可以買現成的試劑盒。先分享自己配置的PI，流式細胞術檢測。PI染色的原理：在不進行細胞通透時，PI不能進入有完整細胞膜的細胞也就是正常細胞和凋亡細胞。而壞死的細胞或者處于焦亡狀態下的細胞，由于細胞膜完整性遭到破壞，所以PI可進入細胞內與DNA結合，所以PI可以鑒別壞死、焦亡細胞。做細胞周期的原理就是，根據細胞周期各個時相的DNA 含量不同（也就是我們高中學的在不同時期DNA是幾個N那個東東）。通常正常細胞的G0// G1 期具有二倍體細胞的DNA含量（2N），G2// M 期具有四倍體細胞的DNA 含量（4N） ,而S期的DNA 含量介于2N和4N之間。細胞75/%冰乙醇固定通透后PI可以與DNA結合，其熒光強度直接反映了細胞內DNA含量。因此，可以用流式細胞內DNA含量進行檢測時，便可將細胞周期區分為G1//G0 期，S 期和G2//M 期,這樣可以得出各個時期細胞百分數。下面是自己配置PI染色。可以自己配置，用1XPBS配置，儲存濃度為1 mg//mL。PI也可單獨購買BioRAD配置好的PI溶液。PI（Bio-RAD，ReadiDrop ）PI.png所有的液體均需要四度預冷，所有離心均為800rpm，2-5min。1.懸浮細胞直接離心收集細胞，棄上清，用預冷PBS洗細胞2-3次（貼壁細胞，棄上清后，常規消化后，離心棄上清后，用預冷PBS洗細胞2-3次）。2.加入預冷70/%乙醇，室溫固定1h或者4℃固定過夜，再或-20℃長期固定（最長做過-20℃固定了45天）。個人建議最好盡快檢測。如果取多個時間點，可以每個時間取回來后-20℃固定等最后一次固定完了一塊測。3.細胞染色離心收集細胞，以1mL的PBS洗細胞2次。加入500uL濃度適宜的PI（一般為10-20ug//mL每1萬個細胞）（稀釋用冰PBS），現加100ug//mL RNase A， 0.2/% Triton X-100。 4℃或者避光孵育30-50min或者室溫20min 。棄上清后，以1mL的PBS洗細胞2次后，用500uLPBS混勻細胞，待流式檢測。4.流式分析

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